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技術(shù)文章
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  • 人淋巴細(xì)胞分離液人淋巴細(xì)胞分離液人淋巴細(xì)胞來源于人外周血,可根據(jù)不同實(shí)驗(yàn)?zāi)康目蛇x擇密度梯度離心法、吸附分離法或其它特殊分離方法。B?yum在密度梯度離心法的基礎(chǔ)上提出通過使用Ficoll®甲泛影鈉溶液離心快速分離的方法,操作更方便、更快速。稀釋的血液在Ficoll®甲泛影鈉溶液中通過短時(shí)間的低速離心即可分層,紅細(xì)胞和粒細(xì)胞沉降至管底、淋巴細(xì)胞和血小板在中間形成2個(gè)分層。人淋巴細(xì)胞分離液使用說明:1.輕輕顛倒瓶子使LSM充分混合2.無菌轉(zhuǎn)移3mlLSM到15ml離心管中。3.混...

    2016 2-19

  • 無血清培養(yǎng)無血清培養(yǎng)基(serumfreemedium,SFM):是不需要添加血清就可以維持細(xì)胞在體外較長時(shí)間生長繁殖的合成培養(yǎng)基。但是它們可能包含個(gè)別蛋白或大量蛋白組分。雖然基礎(chǔ)培養(yǎng)基加少量血清所配制的*培養(yǎng)基可以滿足大部分細(xì)胞培養(yǎng)的要求,但對有些實(shí)驗(yàn)卻不適合,如觀察一種生長因子對某種細(xì)胞的作用,這時(shí)需要排除其他生長因子的干擾作用。而血清中可能含有各種生長因子;又如需要測定某種細(xì)胞在培養(yǎng)過程中分泌某種物質(zhì)(抗體、生長因子)的能力;或者要大規(guī)模的培養(yǎng)某種細(xì)胞,以獲得它們的分泌產(chǎn)物。無血...

    2016 1-29

  • 細(xì)胞的凍存和復(fù)蘇實(shí)驗(yàn)用試劑一、原理在不加任何條件下直接凍存細(xì)胞時(shí),細(xì)胞內(nèi)和外環(huán)境中的水都會(huì)形成冰晶,能導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)發(fā)生機(jī)械損傷、電解質(zhì)升高、滲透壓改變、脫水、PH改變、蛋白變性等,能引起細(xì)胞死亡。如向培養(yǎng)液加入保護(hù)劑,可使冰點(diǎn)降低。在緩慢的凍結(jié)條件下,能使細(xì)胞內(nèi)水份在凍結(jié)前透出細(xì)胞。貯存在-130℃以下的低溫中能減少冰晶的形成。細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)速度要快,使之迅速通過細(xì)胞zui易受損的-5~0℃,細(xì)胞仍能生長,活力受損不大。目前常用的保護(hù)劑為二甲亞砜(DMSO)和甘油,它們對細(xì)胞無毒性,分子量小,溶解度大,易穿...

    2016 1-20

  • 細(xì)胞培養(yǎng)過程中的注意事項(xiàng)及試劑配制 一.常用設(shè)備準(zhǔn)備室的設(shè)備:單蒸餾水蒸餾器、雙蒸餾水蒸餾器、酸缸、烤箱、高壓鍋、儲(chǔ)品柜(放置未消毒物品)、儲(chǔ)品規(guī)(放置消毒過的物品)、包裝臺(tái)。配液室的設(shè)備:扭力天平和電子天平(稱量藥品)、PH計(jì)(測量培養(yǎng)用液PH值)、磁力攪拌器(配置溶液室攪拌溶液)。培養(yǎng)室的設(shè)備:液氮罐、儲(chǔ)品柜(存放雜物)、日光燈和紫外燈、空氣凈化器系統(tǒng)、低溫冰箱(-80℃)、空調(diào)、二氧化碳缸瓶、邊臺(tái)(書寫實(shí)驗(yàn)記錄)。必須放在無菌間的設(shè)備:離心機(jī)(收集細(xì)胞)、超凈工作臺(tái)、倒置顯微鏡、CO2孵箱(孵育培養(yǎng)物)、...

    2015 12-23

  • 細(xì)胞凍存解決方案細(xì)胞凍存解決方案細(xì)胞凍存步驟:1.預(yù)先配制凍存液:10%DMSO+90%胎牛血清,4℃冰箱保存預(yù)冷;2.用胰酶對細(xì)胞進(jìn)行消化:倒去培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基或用槍小心吸去培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基,PBS沖洗兩次,用胰酶消化細(xì)胞(盡可能溫和);3.再次用*培養(yǎng)液懸浮細(xì)胞,將預(yù)冷的凍存液加入消化*的細(xì)胞中,用滴管輕輕吹打混勻。4.在每支凍存管中加入1ml細(xì)胞液,密封后標(biāo)記凍存細(xì)胞名稱和凍存日期。5.凍存步驟的細(xì)致直接關(guān)系到細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)的活力,如果有程序降溫器(放在-80℃冰箱過夜,放入液氮罐);或者...

    2015 12-8

  • 神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)基自然篩選法多年的研究使神經(jīng)干細(xì)胞的分離培養(yǎng),體外擴(kuò)增等技術(shù)日臻完善?,F(xiàn)在科學(xué)家們已克隆了人體的神經(jīng)干細(xì)胞,并將其在體外培養(yǎng),擴(kuò)增。zui近,有研究又將人的神經(jīng)干細(xì)胞成功地植入了胚胎鼠腦中,這些干細(xì)胞研究在人體的應(yīng)用,使其從實(shí)驗(yàn)室逐步走向了臨床,為人類神經(jīng)系統(tǒng)疾病的治療提供了一個(gè)全新的視角。神經(jīng)系統(tǒng)疾病的基因?qū)胫委熑缜八?,癌基因轉(zhuǎn)染干細(xì)胞形成的永生細(xì)胞系不僅可以成功地整合于植入部位,而且可以穩(wěn)定地表達(dá)轉(zhuǎn)染的外源性基因,這就為中樞神經(jīng)系統(tǒng)的基因治療提供了一個(gè)性能*的載體。利用溫度敏感性...

    2015 10-28

  • 心肌細(xì)胞分化培養(yǎng)基的作用由于人類心臟電生理學(xué)特性,其心肌細(xì)胞的去極化時(shí)程與嚙齒類動(dòng)物差異很大。例如,人心臟生理?xiàng)l件下每分鐘搏動(dòng)60-90次,而小鼠為500-700次,大鼠為300-400次。因此,在小動(dòng)物心肌細(xì)胞模型中發(fā)現(xiàn)的理論,當(dāng)需要進(jìn)一步在驗(yàn)證時(shí),由于缺失人類心肌系統(tǒng),只能取用其他大型哺乳動(dòng)物的原代分離心肌細(xì)胞替代。而這些細(xì)胞的來源都不穩(wěn)定,實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重復(fù)性也無法保證。由于*的原因,基本沒有可能獲得并培養(yǎng)原代人心肌細(xì)胞,以心肌細(xì)胞為代表的心肌細(xì)胞,是目前和將來*的人源心肌細(xì)胞來源。心肌細(xì)胞可以極...

    2015 10-27

  • 心肌細(xì)胞培養(yǎng)基的廣泛應(yīng)用心肌細(xì)胞,是目前和將來*的人源心肌細(xì)胞來源。由于人類心臟的生化和分子生物學(xué)特性,其心肌細(xì)胞的很多核心功能蛋白與小鼠等模式動(dòng)物不同。例如,小鼠心肌細(xì)胞主要表達(dá)α重鏈肌球蛋白,以適應(yīng)高頻率的搏動(dòng),而人類心肌細(xì)胞主要表達(dá)β重鏈肌球蛋白,適應(yīng)低頻率的搏動(dòng)。此外,以Ito和Ik為代表的鉀離子通道在不同種屬動(dòng)物及人類心肌細(xì)胞間的表達(dá)和功能差異極大,對于動(dòng)作電位形成的貢獻(xiàn)也各不相同。傳統(tǒng)研究采用的心肌細(xì)胞,主要是采用從新生或成年動(dòng)物心臟分離獲得的原代心肌細(xì)胞。同時(shí),此類細(xì)胞還存在:分離技術(shù)...

    2015 10-19

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