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Cygnus Vero細(xì)胞HCP ELISA檢測(cè)試劑盒的檢測(cè)原理

更新時(shí)間:2023-02-01 點(diǎn)擊次數(shù):1076
CygnusVeroCellHCPELISAKitVero細(xì)胞HCP試劑盒檢測(cè)原理:  
VeroCell檢測(cè)是一個(gè)雙位點(diǎn)酶聯(lián)免疫檢測(cè)。樣本中包含的VeroCellHCPs蛋白與標(biāo)記有抗-VeroCell抗體的辣根過氧化物酶同時(shí)反應(yīng),反應(yīng)發(fā)生在之前涂有一層吸附性抗-VeroCell蛋白抗體的微量滴定板中進(jìn)行。免疫反構(gòu)成為夾層式結(jié)構(gòu):固相抗休-HCP-酶標(biāo)記抗體。反應(yīng)結(jié)束后清洗微量滴定板去除未結(jié)合反應(yīng)物。添加TMB作用底物反應(yīng)。微量滴定板讀數(shù)器上測(cè)定水解物濃度,水解物濃度與VeroCellHCPs蛋白濃度成比例。用提供的標(biāo)準(zhǔn)液繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)讀數(shù)可以計(jì)算出VeroCellHCPs蛋白含量。  
檢測(cè)過程:  
取出所有試劑平衡到室溫→分別移取50µl標(biāo)準(zhǔn)液,對(duì)照物和樣品至待測(cè)孔→移取100µlanti-VeroCell:HRP(#F501)至每孔→密封滴定板,搖床室溫溫育2小時(shí),180rpm→清空小孔,用紙吸干殘留液,350µl清洗緩沖液清洗4次→加100µlTMB作用物(#F005)→室溫靜置30分鐘,不需搖床→加100µl反應(yīng)終止液(#F006)→分光光度計(jì)450/650nm讀數(shù)  
結(jié)果分析:  
標(biāo)準(zhǔn)液(0,2,8,25,75,200ng/mL)可用于制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,標(biāo)準(zhǔn)液濃度相當(dāng)于免疫反應(yīng)HCP總濃度。根據(jù)測(cè)定的小孔中標(biāo)準(zhǔn)液吸光值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。數(shù)據(jù)分析可以使用計(jì)算機(jī)選配曲線,例如點(diǎn)到點(diǎn),三次樣本函數(shù),或四參數(shù)邏輯曲線。不要使用線性回歸分析修改樣品吸光值,這樣會(huì)出現(xiàn)顯著誤差。也可以手工繪圖,Y軸標(biāo)注吸光值,X軸標(biāo)注濃度。然后根據(jù)樣品吸光值計(jì)算出樣品中HCP濃度。(操作時(shí)每一濃度標(biāo)準(zhǔn)液都要滴定到兩個(gè)小孔中,以便計(jì)算平均分光光度值,樣品也需計(jì)算平均吸光值)。

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