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淺談Lonza支原體檢測(cè)試劑盒的檢測(cè)原理
點(diǎn)擊次數(shù):1434 更新時(shí)間:2014-03-29
支原體檢測(cè)試劑盒:支原體又稱霉形體,沒(méi)有細(xì)胞壁的原核生物,為目前發(fā)現(xiàn)的zui小的zui簡(jiǎn)單的原核生物。支原體細(xì)胞中*可見(jiàn)的細(xì)胞器是核糖體(支原體是原核細(xì)胞,原核細(xì)胞的細(xì)胞器只有核糖體)。它對(duì)許多抗生素具有抗性,如類胸膜肺炎微生物。
支原體檢測(cè)試劑盒常規(guī)檢測(cè)才能有效避免細(xì)胞支原體污染
1.常規(guī)性的進(jìn)行支原體檢測(cè)是保證細(xì)胞培養(yǎng)中不受到支原體污染影響的*途徑。
2.傳統(tǒng)的支原體檢測(cè)方法需要在特殊的選擇性培養(yǎng)基作用下對(duì)樣品進(jìn)行培養(yǎng),時(shí)間往往達(dá)數(shù)周,費(fèi)時(shí),費(fèi)力并且無(wú)法獲得足夠的靈敏度和特異性。
美國(guó)Lonza MycoAlert Mycoplasma Detection Kit支原體檢測(cè)試劑盒是利用支原體酶的這一特定活性,進(jìn)行選擇性的生物化學(xué)檢測(cè)。這些酶的存在提供了一種快速的篩選操作,能靈敏地檢測(cè)出樣本中的支原體污染。這些存活的支原體被溶解,然后釋放出來(lái)的酶與支原體檢測(cè)試劑盒中提供的底物發(fā)生催化反應(yīng),將ADP轉(zhuǎn)化成ATP。通過(guò)測(cè)量樣品中添加底物前后ATP的含量,可以得到一個(gè)比率,該比率指示支原體是否存在。如果這些酶不存在,第二次讀數(shù)相對(duì)于*次讀數(shù)就沒(méi)有增加;如果酶與底物進(jìn)行特異性反應(yīng),就會(huì)導(dǎo)致ATP含量上升。ATP含量的上升通過(guò)生物發(fā)光化學(xué)反應(yīng)可以檢測(cè)到,其公式如下:
Luciferase
ATP + Luciferin + O2 ——————> Oxyluciferin + AMP
Mg 2+ + PPi + CO2 + LIGHT
這個(gè)反應(yīng)的發(fā)生是在室溫(18°C~22°C)進(jìn)行的,也是熒光素酶反應(yīng)的*溫度。
在支原體檢測(cè)試劑盒的檢測(cè)原理中,zui后通過(guò)分光光度計(jì)讀數(shù),由于發(fā)出光的強(qiáng)度與ATP的濃度成線性關(guān)系,因此可檢測(cè)支原體的污染問(wèn)題。
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