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胰酶使用注意及貼壁細(xì)胞的消化

更新時間:2016-04-25 點擊次數(shù):2756
     胰酶為類白色至微帶黃色的粉末;微臭,但無霉敗的臭氣;有引濕性;水溶液煮沸或遇酸即失去酶活力。胰酶是胰蛋白酶、胰淀粉酶、胰脂肪酶的混合物。在中性或弱堿性條件下活性較強,胰蛋白酶能使蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)化為蛋白胨,胰淀粉酶能使淀粉轉(zhuǎn)化為糖,胰脂肪酶則能使脂肪分解為甘油及脂肪酸,從而促進消化、增進食欲。
    胰酶主要用于消化不良,食欲不振及肝、胰腺疾病引起的消化障礙,同時也適用于先天性胰功能不全、腹部手術(shù)和外傷胰腺切除導(dǎo)致的胰功能不全?;蛭唇?jīng)手術(shù)切除后天引起的胰功能不全及酒精中毒引起的慢性胰腺炎等。
   

胰酶使用注意及貼壁細(xì)胞的消化:

    1.在使用胰酶細(xì)胞消化液的過程中要特別注意避免消化液被細(xì)菌污染。
    2.胰酶細(xì)胞消化液消化細(xì)胞時間不宜過長,否則細(xì)胞鋪板后生長狀況會較差。
    貼壁細(xì)胞的消化:
    1.吸去培養(yǎng)液,用無菌的PBS、Hanks液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次,以去除殘余的血清
    2.加入少量胰酶細(xì)胞消化液,略蓋過細(xì)胞即可,根據(jù)胰酶效率差異可以增加惑減少胰酶用量。室溫放置30秒至2分鐘(不同的細(xì)胞消化時間有所不同)
    3.顯微鏡下觀察,細(xì)胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化呈白茫狀;或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來。
    4.此時吸除胰酶細(xì)胞消化液。加入含血清的*細(xì)胞培養(yǎng)液,吹打下細(xì)胞,即可直接用于后續(xù)實驗如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入胰酶細(xì)胞消化液重新消化。鈣離子、鎂離子和血清蛋白的存在會降低胰酶活力。因此,胰酶溶液常用無Ca2+、Mg2+的D-Hanks’ 平衡鹽溶液配制成0.25%溶液。消化細(xì)胞時,加入一些血清或含血清的培養(yǎng)液,或胰蛋白酶抑制劑能終止胰蛋白酶對細(xì)胞的消化作用。
    如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時間過長,未及吹打細(xì)胞,細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落,直接用胰酶細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來。1000-2000g離心1分鐘,沉淀細(xì)胞,盡量去除胰酶細(xì)胞消化液后,加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞,即可用于后續(xù)實驗。

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