Lonza支原體檢測試劑盒利用熒光染料檢測步驟
Lonza支原體檢測試劑盒是利用熒光染料(bisbenzimide,Hoechst33258)檢測支原體污染
Lonza支原體檢測試劑盒操作步驟:
貼壁細(xì)胞:
1、被檢細(xì)胞接種于無菌的6孔細(xì)胞培養(yǎng)板中,接種密度為1-2×104。同時,接種正常無支原體感染的同種細(xì)胞,作為陰性對照。
2、5天后,先吸去培養(yǎng)液,再加入1ml的固定液,靜置20min,
3、吸去固定液,晾干。
5、吸去Hoechst33258工作液,加入2ml滅菌超純水洗滌三次,直接風(fēng)干。風(fēng)干后加入一滴封片液,并以蓋玻片覆蓋。
6、熒光顯微鏡觀察。用紫外激發(fā)光激發(fā),觀察細(xì)胞周圍是否有藍(lán)色熒光小點或串珠狀熒光小點。
懸浮細(xì)胞:
1、收集需檢測的細(xì)胞,1500rpm,5min。
2、將收集的細(xì)胞涂片于載玻片上,再加1ml的固定液,靜置20min。
3、吸去固定液,晾干。
4、于每孔中,加入1ml的Hoechst33258工作液(Hoechst33258工作液須覆蓋全部被檢細(xì)胞),37℃避光放置15~20min或室溫靜置20~30min。
5、吸去Hoechst33258工作液,用無菌水洗滌玻片3次,直接風(fēng)干。風(fēng)干后加入一滴封固液,并以蓋玻片覆蓋。
6、熒光顯微鏡觀察。用紫外激發(fā)光激發(fā),觀察細(xì)胞周圍是否有藍(lán)色熒光小點或串珠狀熒光小點。
結(jié)果判斷(參考):
陰性:僅見細(xì)胞的細(xì)胞核呈現(xiàn)黃綠色熒光。
陽性:除細(xì)胞外,細(xì)胞周圍可見大量的大小均一的熒光著色顆粒。